种间交配偏向可能驱动白纹伊蚊位移埃及伊蚊在其范围扩展期间

摘要

白纹伊蚊是世界上最具侵袭性的蚊子，经常取代伊蚊。埃及伊蚊出现在种群重叠的地区。种间交配被认为是这种迁移的可能原因，但这是否适用于它们的同乡范围仍不清楚。白纹伊蚊和伊蚊;在中国异域和同域采集埃及伊蚊，采用不同杂交和性别选择进行笼内交互实验。结果证实，这些种群存在不对称种间交配，异域伊蚊之间存在不对称种间交配。雄白纹伊蚊和伊蚊;埃及伊蚊雌蚊的比例(55.2%)明显高于伊蚊雌蚊。埃及伊蚊雄性和伊蚊;雌白纹伊蚊(27.0%)和同域蚊(6.2%)的频率偏差相似，但较低，分别为25.7%和6.2%。交配后雌伊蚊可与同种雄伊蚊进行二次交配，雌伊蚊的二次交配成功率为66.7%。白纹伊蚊的比例明显高于伊蚊的9.3%。蚊雌性。依蚊的交配率为17.8%。暴露于白纹伊蚊混合池的雄白纹伊蚊。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊雌蚊占9.3%;埃及伊蚊雄性与混合伊蚊;埃及伊蚊和伊蚊。雌性白纹伊蚊是种间的。雄性伊蚊翅片长度的差异。白纹伊蚊(0.524 mm);埃及伊蚊(0.409 mm)可能与相应的配偶相关。我们得出结论，更强的Ae。雄性白纹伊蚊的种间交配和雌性白纹伊蚊更强烈的种内交配会导致色狼效应，从而导致白纹伊蚊的竞争位移。埃及伊蚊是异域伊蚊。白纹伊蚊在活动范围扩大时入侵。

介绍

埃及伊蚊是登革热、寨卡病毒和黄热病病毒的主要媒介，主要分布在全球热带地区(1-3)。白纹伊蚊是基孔肯雅病毒最重要的传播媒介，也可传播登革热病毒。此外，它是世界上最具侵略性的蚊种，广泛分布于热带、亚热带和温带地区。现在在除南极洲以外的所有大陆都有发现。伊蚊及其传播的病毒病原体是公共卫生的主要威胁(7)。

埃及伊蚊和伊蚊。白纹伊蚊有着相似的生命周期和生态位，经常被发现是对称分布的(8,9)。埃及伊蚊自1880年以来在美国佛罗里达州被发现(10)。当Ae。白纹伊蚊于20世纪80年代入侵美国(11,12)，逐渐取代伊蚊。埃及伊蚊是当地优势种(13,14)，甚至在某些地区造成完全迁移(15-17)。同样,Ae。埃及伊蚊在20世纪80年代曾是中国海南的优势种(18)，并在该岛和邻近的雷州半岛(广东、海南和广西的交界地区)引起了几次登革热大流行(19)。当时，Ae。岛上很少发现白纹伊蚊。最近的几项研究报告说，Ae。埃及伊蚊现在在该地区很罕见。白纹伊蚊分布广泛(20)。Ae。埃及伊蚊和伊蚊。白纹伊蚊自20世纪80年代开始在雷州半岛出现(21)。从那时起，伊蚊的数量和密度。该地区埃及伊蚊数量呈下降趋势，目前仅在湛江市乌市镇、七水镇等有限区域发现少量埃及伊蚊，且有扩散趋势。白纹伊蚊完全取代伊蚊。埃及伊蚊在不久的将来(22)。在美国东南部(23,24)和百慕大(25)也报道了类似的物种替代趋势。移位白纹伊蚊。埃及伊蚊的速度相当快。目前还不清楚Ae是如何做到的。白纹伊蚊取代伊蚊。埃及伊蚊虽然存在繁殖地点的竞争，种间交配的不对称以及雄性副腺蛋白的影响(24,26 - 28)。

Satyrization是一种交配干扰的形式，其中一个物种的雄性与另一个物种的雌性交配，不会产生杂交后代，并显著降低雌性起源物种的生殖适合度(27,29,30)。有人提出，饱和化可能是入侵物种，特别是伊蚊竞争性取代常驻蚊子的原因。埃及伊蚊蚊(24)。笼内实验和野外观察表明;雄性白纹伊蚊能够与其他隐纹伊蚊亚属物种的雌性交配，这可能导致竞争性迁移，并可能导致灭绝，尤其是岛屿上的特有物种(27)。然而，伊蚊种间交配的一般动态。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊是未知的。

收集白纹伊蚊和伊蚊。利用来自中国同域和异域的埃及伊蚊来研究饱和化的动态(图S1和表S1，补充资料)。种间和种内的交配和残馀。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊对伊蚊表现出强烈的偏好。在可能与伊蚊重叠的地区发现白纹伊蚊。蚊。这些数据证实并扩展了在美国佛罗里达州的人群中所看到的情况(24,31)。

结果

不对称种间交配在实验室和野外衍生的物种中以不同的频率发生Ae。蚊和Ae。蚊在中国

对实验室和野外采集的蚊子进行了两组种间交配。交配I由雄性Ae组成。白纹伊蚊与雌伊蚊杂交。埃及伊蚊和交配II型有雄性伊蚊。埃及伊蚊与雌性伊蚊杂交。蚊。总共进行了两个对照交配组:对照1为雄性伊蚊;白纹伊蚊与雌伊蚊杂交。对照二为白纹伊蚊;埃及伊蚊与雌性伊蚊杂交。蚊。两组均观察到种间交配(图1;表S2，补充材料)。实验蚊种间交配率ⅰ组(55.2±2.2%)显著高于ⅱ组(27.0±3.3%);t = 7.15, d.f. = 4, P = 0.0020)。这种不对称性在同域野外采集的蚊子中也存在，杂交ⅰ和杂交ⅱ的不对称性分别为25.7%±1.0%和6.2±1.3% (t = 12.07, d.f = 4, P = 0.0003)，但发生频率较低。这些数据支持了伊蚊种间交配的结论。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊是不对称的。雄白纹伊蚊的交配成功率远高于伊蚊。雄蚊。此外，同种异域实验室种群与广东同域野外种群之间较高的种间交配率(学生t检验，均P < 0.01)支持这样的假设，即延长的同域关系可能导致两种物种之间选择更强的早熟屏障，尤其是伊蚊。蚊(32)。

种间交配的雌蚊不能产生可存活的后代

所有交配组的雌性总体产卵率均较高(χ2 = 6.51, df = 5, P = 0.0852)，无论未交配、种间交配或种内交配(表S3，补充资料)。然而，每只雌性的卵数在不同的交配组之间存在差异，并且所有跨种交配的卵孵化率均为零，因此没有产生后代。对照种内卵孵化率为74.1%至79.4%，这些综合数据支持并证实了之前的报道，即任何方向的种间交配都不会产生可存活的后代(图1)(24)。

在种间交配的雌性和同种的雄性之间交配

只对实验室饲养的蚊子种群进行了种间交配雌蚊和同种雄蚊的交配实验。如预期的那样，伊蚊的残留率很低，为9.3±1.0%。众所周知，埃及伊蚊的第一次交配会抑制随后的交配(33,34)(图1;表S4，补充材料)。白纹伊蚊的残留率为66.7±4.2% (t = 11.24, df = 4, P = 0.0004)，显著高于白纹伊蚊，残留的优势比为25.6 (95% CI: 7.3 ~ 90.1)。白纹伊蚊蚊。与此相似的是，经跨种交配的雌蚊产卵的孵化率也显著高。白纹伊蚊(35.8%±4.2%);埃及伊蚊(4.9±1.8%);t = 6.78, d.f. = 4, P = 0.0025)。这些数据支持了杂交雌性伊蚊的结论。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊可以与同类型的雄性交配，前者更有可能繁衍后代。然而，物种之间的基本差异可以解释这些观察到的差异(35)。

男性Ae。蚊和Ae。蚊在竞争试验中与同种和种间雌性进行不同的交配

一系列的两次交配实验(“雄性选择”)的结果，雄性-白，包括Ae;雄性白纹伊蚊与混合伊蚊杂交。白纹伊蚊和伊蚊。雌性埃及伊蚊和雄性埃及伊蚊。埃及伊蚊雄性与伊蚊杂交。埃及伊蚊和伊蚊。实验种群种间交配率分别为17.8±0.1%和9.3±1.3% (t = 5.25, d.f = 3, P = 0.0135)，广东野外种群种间交配率分别为11.8±0.6%和2.0±0.4% (t = 13.77, d.f = 4, P = 0.0002)(图2;表S5，补充材料)。对照种内交配率为100%。男性Ae。白纹伊蚊种间交配比例比雄伊蚊高2 ~ 5倍。同种异域种群(实验室种群)高于同域种群(广东野外种群)。这些发现支持了一个结论，即雄蚊选择是种间交配的重要因素，并且与为了更强大的交配屏障而进行的长时间的同域选择是一致的(31,32)。

雌性选择在种间交配中并不起主要作用Ae。蚊和Ae。蚊

类似的雌性实验(“雌性选择”)。雌白纹伊蚊与伊蚊杂交。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊的雄性和雌性杂交。埃及伊蚊雌性与伊蚊;埃及伊蚊和伊蚊。雄性白纹伊蚊的种内交配率相似，范围为83.2±5.2%至93.9±3.9%(图2;表S6，补充材料)。种间交配率也相似，在3.5±2.5% ~ 8.5±4.3%之间(学生t检验，P均> 0.05)。这些结果支持了雌蚊选择的结论。白纹伊蚊埃及伊蚊在随后的种间交配中并不起主要的交配障碍作用。

种间交配的证据Ae。蚊和Ae。蚊在田间蚊子中

野外采集的成年雌伊蚊种内交配率为46.9±3.6% ~ 57.5±7.2%。白纹伊蚊和伊蚊。(χ2检验，P均> 0.05;图2;表S7，补充材料)。雄伊蚊的种间交配率明显高于雄伊蚊。白纹伊蚊和雌伊蚊。埃及伊蚊或雄性伊蚊埃及伊蚊和雌性伊蚊。湛江白纹伊蚊感染率分别为4.3±2.9%和1.6±0.9%，景洪白纹伊蚊感染率分别为9.1±3.1%和5.5±1.6%。只有Ae的交配偏差。埃及伊蚊雄伴伊蚊;湛江、景洪两地白纹伊蚊雌蚊差异有统计学意义(P < 0.05)。有趣的是,Ae。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊在湛江有40多年的同域性(21)，而在景洪有不到10年的同域性(36)，这些数据与延长同域性选择导致两种之间的早熟屏障的假设相一致(32,37)。

白纹伊蚊雄性的手掌比雌性的长Ae。蚊男性

形态特征可能是造成伊蚊种间交配差异的因素之一。白纹伊蚊和伊蚊。蚊。虽然雌蚊一般比同类型雄蚊大，但雌雄伊蚊的大小和颜色都不同。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊相似(图3;表S8，补充材料)。50只雄蚊和雌蚊的平均体重、体长、翅长和腿长也相似。与此相反，雄伊蚊的翅片平均长度。实验室孳生白纹伊蚊和湛江地源伊蚊的体长分别为0.524±0.003 mm和0.518±0.003 mm，明显长于雄伊蚊。埃及伊蚊(实验室菌株0.409±0.002 mm;野蚊0.409±0.003 mm;学生t检验，均P < 0.0001)。

白纹伊蚊交配的周期比雌鸟的要长Ae。蚊

间种I: Ae的种间交配视频成像。雄白纹伊蚊伴伊蚊;埃及伊蚊雌蚊和间种II:伊蚊。埃及伊蚊雄伴伊蚊;雌性白纹伊蚊出现抓抓事件(n = 261;雄蚊试图与雌蚊交配。雄白纹伊蚊伴伊蚊;雌埃及伊蚊明显低于雌埃及伊蚊。埃及伊蚊雄蚊对抗伊蚊;雌性白纹伊蚊(n = 2650)。埃及伊蚊雄性对异种雌性的追求比雄性更积极。白纹伊蚊(图4;表S9，补充材料)。交配尝试率、交配成功率和交配失败率分别为101、49和51.49%，交配成功率分别为1365、687和49.67%。这些数据支持了两种雌蚊对种间雄蚊的接受程度相似，雌蚊在择偶中不占主导地位的结论。交配期I为14.78±2.12 s，授精率为17.54±0.47%，显著长于交配期II的6.54±0.19 s，显著高于交配期II的7.66±0.34%(学生t检验，P < 0.01)。对照I (Ae)的交配持续时间。雄白纹伊蚊伴伊蚊;雌白纹伊蚊的潜伏期为20.60±0.95 s，显著长于对照II的7.55±0.32 s(学生t检验，P < 0.0001)。埃及伊蚊雄伴伊蚊;蚊雌性;图S3和表S9(补充材料)。这些结果与种间交配率一致，并与伊蚊和伊蚊之间的雄肢长度一致。白纹伊蚊和伊蚊。蚊。

讨论

这些实验结果表明，不对称种间交配可以发生在伊蚊之间。白纹伊蚊和伊蚊。这些发现与美国东南部(24,38,39)和百慕大(25)的研究结果一致。种间交配。雄白纹伊蚊和伊蚊;雌埃及伊蚊的交配频率明显高于雌埃及伊蚊。埃及伊蚊雄伴伊蚊;蚊雌性。异域菌株的种间交配也比同域菌株更频繁。此外，与种间雄性交配的雌性不会产生后代。这些结果为观测到Ae的逐渐位移提供了依据。埃及伊蚊湛江白纹伊蚊。从这些结果，我们得出结论，Ae。白纹伊蚊抑制伊蚊的繁殖。埃及伊蚊通过种间交配繁殖，这是物种竞争中物化的一个例子。这些观察结果扩展了先前研究结果的结论，包括中国大规模的入侵和流离失所。

授精率通常用于评估雄性蚊子的表现(40-42)，但雌性选择的作用及其对交配结果的影响程度尚不清楚(43,44)。本研究观察到的雄性选择组种间交配频率存在显著差异。雄白纹伊蚊与伊蚊的交配频率更高。埃及伊蚊雌蚊，即使在同种雌蚊存在的情况下，也比伊蚊雌蚊少。埃及伊蚊雄性与伊蚊;雌性白纹伊蚊在相似的选择条件下。相比之下，在女性选择实验中没有观察到显著差异。这些发现支持了伊蚊种间交配的结论。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊以雄性行为为主;白纹伊蚊比雄性伊蚊更频繁地进行种间交配。蚊。虽然雌性在交配偏向中选择的证据并不明显，但随着物种经历更长的同体期，这可能成为一种交配障碍(32,37)。这种不对称交配加上种间交配的雌性不育将对物种迁移产生重大影响。

雄性交配行为和形态可以部分解释不对称种间交配偏向。其中一个相关的因素是Ae中叶柄的平均长度。雄白纹伊蚊明显长于伊蚊。雄蚊。在交配过程中，锁扣用来紧紧握住雌性，防止在精子转移过程中轻易脱离，因此，交配更成功。较长的交配时间和较高的受精率。与雄白纹伊蚊比较。通过视频实验对埃及伊蚊进行了观察和检测。我们不认为这些形态差异单独解释了雄性驱动的不对称交配成功，但它们可能与其他因素(包括性信息素(45)和翅膀拍打频率(46,47))结合在一起产生叠加效应。需要进一步的研究来阐明这些和其他不对称种间交配的潜在机制。

雌蚊在其生殖寿命(48-50年)中通常只交配一次，因为第一次交配的精子可以储存在精子囊中，并在随后的性淋周期中使用(51)。此外，附性腺分泌的物质与精子一起传递给雌性，改变了雌性的交配行为，以防止交配(33,52)。然而，我们在这里展示了Ae。白纹伊蚊以前经历过种间交配的埃及伊蚊雌性可以与同种雄性交配并产生可存活的后代。值得注意的是，伊蚊的滞留率和孵化率。雌白纹伊蚊明显高于雌伊蚊。蚊。这可能是由于在种间杂交中雄性副腺蛋白抑制的效果不同(24)。从伊蚊精液中分离出HP-1辅助蛋白。白纹伊蚊可能对伊蚊施加强制的一夫一妻制父权。对埃及伊蚊的繁殖和二次交配均有抑制作用。埃及伊蚊雄蚊对雌伊蚊无影响。蚊(53)。与雌性生殖活动相关的其他因素可能存在于雄性的精液中(33,54)，需要更多的研究来澄清。

白纹伊蚊和伊蚊;埃及伊蚊具有相似的生命周期特征和生态习性(8,55,56)，以及相似的大小、体重和翅膀长度。因此，这两种蚊子也可能具有相似的群体行为、拍打翅膀的频率和其他使偶尔的种间交配成为可能的预交配因素。由于种间交配的繁殖成本很高，没有可存活的后代，因此在养育这两个物种的祖先蚊子分化期间，可能会选择对抗种间交配的抗性(32,37)。与这一预期相一致的是，在野外衍生的湛江样品中，伊蚊的种间交配。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊至少有40年的同域关系，明显低于两种蚊子只有不到10年同域关系的样本。这两个物种在美国佛罗里达州的同域生境也有类似的观察报告(32,37)。这两种蚊子更长时间的密切接触可能导致更强的早熟障碍，从而可以避免和减少错误的种间交配。这种观察到的不对称性也可以解释Ae。白纹伊蚊作为一种入侵地区。埃及伊蚊已经存在，导致后者被压制和消灭。

结论

从这些研究中我们可以得出结论:伊蚊的种间不对称交配。白纹伊蚊和伊蚊。以伊蚊为特征的埃及伊蚊。雄性白纹伊蚊的种间交配频率高于伊蚊。雄性埃及伊蚊和雌性埃及伊蚊。白纹伊蚊同种交配频率较高是同域蚊子分布地区的普遍现象。这就导致了一种被称为饱和化的物种竞争。白纹伊蚊可以取代伊蚊。蚊。这种不对称与牙齿长度和女性一夫一妻制有关。这些发现揭示了伊蚊种间交配和种间竞争的一些潜在因素和机制。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊是两种重要的病媒和入侵物种。此外，观察到的偏差可能补充和增强昆虫不育技术(SIT)在影响两种物种共域并能够传播相同病原体的地区的病原体传播动力学方面的功效。

材料与方法

蚊种及饲养

实验室Ae。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊菌株已经在我们的实验室定植多年。湛江伊蚊野外衍生菌落。白纹伊蚊和伊蚊。2019 - 2021年，在广东省湛江市乌市镇多处人工容器(废弃轮胎和水桶)中采集埃及伊蚊，用于交配实验的种群为第二代至第四代(F2至F4)。饲养条件为27±1℃，70±10%湿度，光照周期14 h /黑暗周期10 h。实验蚊幼虫(200只/l水)饲养于含脱氯水的不锈钢托盘中，每日饲喂酵母和龟粮。分别收集两种昆虫的蛹，用2毫升埃彭多夫管加1毫升水固定。当成虫出现时，分别通过检查鳞片和触须来确定成虫的种类和性别。将不同性别和种类的成虫分别置于带网盖的纸碗(9.5 × 6.7 × 6.2 cm3)中，并在棉芯上提供10%蔗糖溶液。

非竞争性(无选择)种间交配实验

实验在20 × 20 × 30 cm3的微环境中进行，每个物种的雄性和雌性分别来自广东省的实验室群体和野外群体。在进行交配实验时，所有的蚊子都在2到3天大。利用室内或野外孳生的蚊虫，在每个圈闭(微观世界)内，将一种蚊的120只雄蚊与另一种蚊的120只未交配雌蚊杂交。蚊子被放置在一起7天。同种的微型世界，包含雄性和雌性。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊被设置为正常的交配对照。此外，每个物种的未交配的雌性单独饲养在微观世界中作为产卵对照。所有雌鼠均用CO2麻醉，并解剖精囊以确定其授精状态。精子在精囊中的存在被记录为授精事件(图S2，补充材料)。每个杂交组合重复3次。

基因扩增(PCR)检测雄性-具体的基因,不行!在交配的雌性中

Nix是一种雄性特异性基因，存在于伊蚊和伊蚊中。白纹伊蚊(57);埃及伊蚊(58)，可用于检测交配的雌性。如果雌蚊交配，雄蚊的精子会转移到雌蚊的精囊中。用PCR法检测卵中的Nix以确定雌性是否已经交配。此外，我们还建立了一种灵敏、特异的巢式PCR方法检测雌蚊体内的Nix，以确定雌蚊是种内交配还是种间交配。引物序列及研究程序见表S10(补充资料)。用AlbNix和AegNix检测蚊卵和雌蚊体内的第1片段，用Nest-AlbNix和Nest-AegNix扩增第1片段内的第2片段。在第一次运行中，使用女性基因组DNA作为模板。第二次检测时，将第一次PCR产物稀释100倍作为模板。每组首次试验均设阳性对照和阴性对照。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后在紫外光下观察，DNA测序证实。

配偶的实验

其余的实验重复了上述的非竞争性(无选择)实验。杂交实验中的雌性在与种间雄性接触一周后被提供血餐。按照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》的建议，将受约束的小鼠放入笼子中。个体肿胀的雌性被转移到250毫升的带有滤纸的纸杯中。雌性有3天的产卵时间。对卵池进行计数，提取DNA作为基因扩增模板，检测Nix基因的存在。为了确保雌性蚊子确实与种间雄性蚊子交配，研究人员只使用对雌性蚊子卵呈阳性反应的蚊子。然后将这些雌性转移到一个纸杯中，以1:1的比例与同种雄性交配5天。血又流了。每只吸血的雌性都被转移到一个装有滤纸的新纸杯里。从每只雌鱼身上收集的卵被计数并孵化，以确定雌鱼产下的卵是能存活的还是不能存活的。活卵的产生是种内受精成功的标志。在对照组中，15岁的处女雌性与3岁的同种雄性接触5天，随后允许吸血。每只吸血的雌性被允许产卵。每个重复10 ~ 20只雌性，重复3次。

雄性选择和雌性选择交配实验

雄性选择实验共取100只雄性吸入含有100只同种和100只异种雌性的微环境(20 × 20 × 30 cm3)中。他们被留下来同居了7天。之后，雌性被移除并在形态学上被鉴定为伊蚊。白纹伊蚊和伊蚊。蚊。然后对雌蚊的精囊进行解剖和显微镜检查。将100只雌性吸入含有100只同种和异种雄性的微环境中进行雌性选择实验。7天后，雌性被移走。将每只雌蚊转移到含有50 μl裂解缓冲液(MiniBEST通用基因组DNA提取试剂盒(Takara-Bio，滋贺，日本)的1.5 ml Eppendorf管中。根据生产厂家的说明，用蛋白酶K和rna酶A在56°C下进行夜间消化。提取DNA后，将样品保存在- 20°C，以待PCR分析。

自然种群中异交的检测

在中国南方和西南两个地区随机抽取成蚊。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊的共存决定了自然种群中潜在的种间交配。在中国两个不同的城市使用动力吸引器进行了人类着陆捕获。吴市镇(东经109°86”，北纬20°56”)位于雷州半岛西南部，是广东省主要渔港之一。另一个城市景洪市(东经101°31 "，北纬22°36 ")位于云南省南部，毗邻缅甸。这两个城市都有伊蚊的幼虫栖息地。白纹伊蚊和伊蚊。蚊。野生雌蚊形态鉴定为伊蚊。白纹伊蚊和伊蚊。埃及伊蚊和储存在乙醇中。它们被转移到一个塑料板上，在去离子水中洗涤三次以去除乙醇。为了进一步确定雌蚊与哪只雄蚊交配，对雌蚊进行了研究。白纹伊蚊、白纹伊蚊和伊蚊;使用先前描述的巢式PCR系统从其基因组DNA中扩增出埃及伊蚊和aegnix)诊断片段。

成蚊测量

雌雄成年伊蚊的体重、体长、翅长、腿长。白纹伊蚊和伊蚊。测定了埃及伊蚊(实验室株)、雄蚊爪长(实验室株和现场广东株)。将蚊子置于烘箱中干燥1 h，以10只蚊子为一组(重复5次)测量其体重。用镊子和解剖剪刀分别对蚊腿、翅膀、身体和雄蚊扣进行分离。用显微镜检查这些细胞，并用电脑和照相机记录图像。使用Image-pro Plus软件测量器官的长度。对50只不同种类和性别的蚊子进行了测量。

种间交配互动的视频观察

采用新出现的实验室菌株2 ~ 3龄蚊子进行交配行为录像。将50只雄性和50只雌性转移到一个定制的视频笼(7 × 11 × 12 cm3)中，使用罗技捕获(Logitech Capture, 1080P, 60fps)数码相机记录雄性和雌性伊蚊之间的交配过程。白纹伊蚊和伊蚊。蚊。录像时间间隔为ZT0-3(亮灯后3 h)和ZT11-14(灭灯前3 h)，连续5天。观察并计算交配次数(雄虫抓雌虫)、交配尝试次数(雄虫卷腹尝试交配)、交配次数(雄虫与雌虫成功交配)、交配失败率、交配持续时间和受精率的平均值。

统计分析

致谢

a.j.是唐纳德·布伦教授。

资金

国家重点研发计划项目(2020YFC1200100)、国家自然科学基金项目(31830087和81829004)、美国国立卫生研究院项目(AI136850)资助X-G.C。

作者的贡献

x.g c, J.Z和S.L.设计了这项研究;j.z.， s.l.和H.L.进行了这项研究;j.z.、s.l.和G.Z.分析了数据;和x - g - c, A.A.J, j - z和s - l共同撰写论文。

数据可用性

所有相关数据都在稿件及其补充信息文件中

笔记

利益竞争:作者声明没有利益竞争。

参考文献

作者指出